Η Μεγάλη Τετάρτη είναι αφιερωμένη στην μεταστροφή της πόρνης που άλειψε με τα μαλλιά της τα πόδια του Χριστού καθώς και στην προδοσία του Ιούδα.
Νωρίς το απόγευμα ψάλλεται η Ακολουθία του Ευχελαίου όπου μεταξύ άλλων αναφέρεται ότι «δεινόν η ραθυμία, μεγάλη η μετάνοια».
Το βράδυ ψάλλεται ο Όρθρος της Μεγάλης Πέμπτης με κεντρικό θέμα τη νίψη των ποδών των Αποστόλων από τον Ιησού, τον Μυστικό Δείπνο, την προσευχή στον Κήπο της Γεσθημανή και την προδοσία του Ιούδα.
Από τα πιο γνωστά τροπάρια της ημέρας είναι το «Του Δείπνου Σου του Μυστικού, σήμερον Υιέ Θεού...» και το «Ότε οι ένδοξοι μαθητές…» που έχει γραφτεί από τον Ρωμανό τον Μελωδό.
Ο Μυστικός δείπνος σύμφωνα με την Χριστιανική πίστη, διεξήχθη ανάμεσα στον Ιησού και τους Δώδεκα Αποστόλους στην Ιερουσαλήμ μία μέρα πριν τη Σταύρωσή του. Σήμερα, η μέρα αυτή ονομάζεται Μεγάλη Πέμπτη.
Κατά τη διάρκεια του Μυστικού Δείπνου ο Χριστός έπλυνε στους μαθητές του τα πόδια τους και τους κοινώνησε το Σώμα και το Αίμα του, λέγοντάς τους: Λάβετε φάγετε τοῦτό μου ἐστι τὸ σῶμά καθώς και: Τοῦτό ἐστι τὸ αἷμά μου τὸ τῆς καινῆς διαθήκης τὸ περὶ πολλῶν ἐκχυνόμενον.
Θεωρείται ως η πρώτη στην Ιστορία της Τέχνης τοιχογραφία που απεικονίζει τους Αποστόλους να αντιδρούν ο καθένας με διαφορετικό τρόπο στην αποκάλυψη του Ιησού ότι κάποιος θα τον προδώσει.